بررسی نقش قطعه ی انتهای آمینو و کربوکسی بر خالص سازی الاستاز سودوموناس آئروجینوزا

thesis
abstract

- متالو پروتئاز ها گروه مهمی از پروتئاز ها می باشند که کاربرد های صنعتی مختلفی در سنتز پپتید، پردازش پروتئین و صنایع غذایی، دارویی و شوینده دارند. الاستاز یکی از آنزیم های این خانواده است. طی مطالعات پیشین آنزیم کایمری از الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا طراحی شد و تلاش های زیادی برای تخلیص این آنزیم با استفاده از انواع روش های کروماتوگرافی صورت گرفت که به خلوص نسبی آنزیم دست یافت. در تحقیق حاضر جهت تخلیص بیشتر این آنزیم دو راه کار مورد استفاده قرار گرفت. در نخستین راه کار، مهندسی پروتئین به گونه ای که توالی-های رمز گردان 3 امینو اسید انتهای کربوکسی آنزیم شامل سرین، آلانین و لوسین و آمینو اسیدهای لایزین، لوسین آلانین، آلانین و آلانین موجود در وکتور pet-21a+ حذف گردد، به عنوان هدف در نظر گرفته شد. بدین منظور پرایمر reverse جدیدی طراحی شد. اغلب این امینو اسید ها آب گریز هستند و قبل از دنباله ی هیستیدینی قرار دارند و احتمال می رفت برش آنها توسط آنزیم مانع از اتصال آنزیم به ستون کروماتو گرافی تمایلی نیکل و در نتیجه مانع از امکان تخلیص آنزیم توسط این روش شود. در راه کار دوم از رسوب دهی و جدا سازی پروتئین های میزبان بیانی از آنزیم الاستاز وحشی و نو ترکیب با استفاده از شوک حرارتی و حلال های آلی متانول و دی متیل فرمامید استفاده شد. در نهایت با استفاده از شوک حرارتی آنزیم کایمر با خلوص نسبتا بالا به دست آمد. هم چنین در مورد آنزیم وحشی خلوص نسبی با رسوب دهی توسط متانول حاصل گردید.

similar resources

ارتباط زاویه بین دمین‌های انتهای آمینو و انتهای کربوکسی با فعالیت آنزیمی ترمولیزین و الاستاز

پروتئاز‌های خانواده ترمولیزین زیر مجموعه‌ای از سوپر فامیلی متالوپروتئاز‌های روی می‌باشند. این خانواده دارای یک یون روی بوده که نقش مهمی در عملکرد آنزیم داشته و همچنین شامل تعداد متفاوتی کلسیم بوده که در پایداری آن‌ها موثر است. عملکرد آنزیم‌های این خانواده به حرکت‌های کانفورماسیونی ویژه‌ی جایگاه فعال بستگی دارد. جایگاه فعال در این خانواده بین دو دمین انتهای آمینو و انتهای کربوکسی واقع شده و پیشن...

full text

کلونینگ ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا

سابقه و هدف: الاستاز حاصل از سودوموناس آئروجینوزا یک آنزیم مهم در زمینه مطالعات بنیادی بر روی Zn-متالوپروتئازها و نیز بعنوان فاکتور ویرولانس این باکتری مطرح است. در این مطالعه ژن مربوط به آنزیم الاستاز از سودوموناس آئروجینوزا (PAE) استخراج و کلون شده و پس از بیان و تخلیص، خصوصیات بیوشیمیایی آن شامل دما و pH بهینه و نیز فعالیت در حور حلالهای آلی گلیسرول، دی متیل فرمامید (DMF)، متانول، اتانول، ا...

full text

کلونینگ ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا

سابقه و هدف: الاستاز حاصل از سودوموناس آئروجینوزا یک آنزیم مهم در زمینه مطالعات بنیادی بر روی zn-متالوپروتئازها و نیز بعنوان فاکتور ویرولانس این باکتری مطرح است. در این مطالعه ژن مربوط به آنزیم الاستاز از سودوموناس آئروجینوزا (pae) استخراج و کلون شده و پس از بیان و تخلیص، خصوصیات بیوشیمیایی آن شامل دما و ph بهینه و نیز فعالیت در حور حلالهای آلی گلیسرول، دی متیل فرمامید (dmf)، متانول، اتانول، ات...

full text

بررسی اثر ساکارومایسس سرویزیه بر حرکت، الاستاز و آلکالین پروتئاز در سودوموناس آئروجینوزا

Background and Objective: According to definition of probiotics by WHO/FAO that is “Live microorganisms which, when present in sufficient amount, confer beneficial effects to the host”. Saccharomyces cerevisiae is the first non-pathogenic yeast which is known as a probiotic for humans that its helpful effects for humankind has been proved. Pseudomonas aeruginosa is one of the most ...

full text

مطالعه خصوصیات بیوشیمی الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا سویه‌ی PTCC1430

سابقه و هدف:  متالوپروتئازها کاربردهای فراوانی در صنعت از جمله در سنتز پپتید و آسپارتام دارند . با این وجود استفاده از آن ها با محدودیت هایی از قبیل ناپایداری به سبب اتولیز مواجه است. در تحقیق حاضر خصوصیات بیوشیمیایی یک متالوپروتئاز (الاستاز) حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا پس از خالص سازی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی پروتئین نوترکیب از E. coli خالص...

full text

مطالعه خصوصیات بیوشیمی الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا سویه ی ptcc۱۴۳۰

سابقه و هدف:  متالوپروتئازها کاربردهای فراوانی در صنعت از جمله در سنتز پپتید و آسپارتام دارند . با این وجود استفاده از آن ها با محدودیت هایی از قبیل ناپایداری به سبب اتولیز مواجه است. در تحقیق حاضر خصوصیات بیوشیمیایی یک متالوپروتئاز (الاستاز) حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا پس از خالص سازی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی پروتئین نوترکیب از e. coli خالص...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه گیلان - دانشکده علوم پایه

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023