بررسی نقش قطعه ی انتهای آمینو و کربوکسی بر خالص سازی الاستاز سودوموناس آئروجینوزا

- متالو پروتئاز ها گروه مهمی از پروتئاز ها می باشند که کاربرد های صنعتی مختلفی در سنتز پپتید، پردازش پروتئین و صنایع غذایی، دارویی و شوینده دارند. الاستاز یکی از آنزیم های این خانواده است. طی مطالعات پیشین آنزیم کایمری از الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا طراحی شد و تلاش های زیادی برای تخلیص این آنزیم با استفاده از انواع روش های کروماتوگرافی صورت گرفت که به خلوص نسبی آنزیم دست یافت. در تحقیق حاضر جهت تخلیص بیشتر این آنزیم دو راه کار مورد استفاده قرار گرفت. در نخستین راه کار، مهندسی پروتئین به گونه ای که توالی-های رمز گردان 3 امینو اسید انتهای کربوکسی آنزیم شامل سرین، آلانین و لوسین و آمینو اسیدهای لایزین، لوسین آلانین، آلانین و آلانین موجود در وکتور pet-21a+ حذف گردد، به عنوان هدف در نظر گرفته شد. بدین منظور پرایمر reverse جدیدی طراحی شد. اغلب این امینو اسید ها آب گریز هستند و قبل از دنباله ی هیستیدینی قرار دارند و احتمال می رفت برش آنها توسط آنزیم مانع از اتصال آنزیم به ستون کروماتو گرافی تمایلی نیکل و در نتیجه مانع از امکان تخلیص آنزیم توسط این روش شود. در راه کار دوم از رسوب دهی و جدا سازی پروتئین های میزبان بیانی از آنزیم الاستاز وحشی و نو ترکیب با استفاده از شوک حرارتی و حلال های آلی متانول و دی متیل فرمامید استفاده شد. در نهایت با استفاده از شوک حرارتی آنزیم کایمر با خلوص نسبتا بالا به دست آمد. هم چنین در مورد آنزیم وحشی خلوص نسبی با رسوب دهی توسط متانول حاصل گردید.